集中的季戊四醇四硝酸酯还原酶定向进化使用自动化厌氧动态筛选site-saturated库。
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Hulley我,Toogood HS, Fryszkowska曼塞尔D,斯蒂芬斯通用,嘉丁纳JM, Scrutton NS
集中的季戊四醇四硝酸酯还原酶定向进化使用自动化厌氧动态筛选site-saturated库。
Chembiochem。2010年11月22日,11 (17):2433 - 47。doi: 10.1002 / cbic.201000527。
- PubMed ID
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21064170 (在PubMed]
- 文摘
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本工作描述一个自动机器人的发展平台的快速筛选酶变异产生的定向进化研究pentraerythritol四硝酸酯(PETN)还原酶,工业生物催化的目标。附近96 -格式,通过使用一个纯酶恢复,适合高通量动态分析;这使得快速筛查酶变异的改进和新的活动库。最初描述的几个单一site-saturation图书馆针对以季戊四醇四硝酸酯还原酶的活性位点残基。两个突变体(T26S和W102F)显示在衬底enantiopreference切换对底物(E) 2-aryl-1-nitropropene alpha-methyl-trans-cinnamaldehyde,分别与ee W102F (R) (62%)。此外,突变体活动较弱的检测与α,beta-unsaturated羧酸基板显示进展以季戊四醇四硝酸酯还原酶的底物范围的扩张。这些方法可以用于快速与其他氧化还原酶酶酶变异的进化。