功能和结构表征四个谷氨酰胺酶的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。
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布朗克,歌手,Proudfoot M, Skarina T,金正日Y, Chang C,德门蒂耶娃我,库兹涅佐娃E,冈萨雷斯CF, Joachimiak, sachenko,雅库宁房颤
功能和结构表征四个谷氨酰胺酶的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。
生物化学。2008年5月27日,47 (21):5724 - 35。doi: 10.1021 / bi800097h。2008年5月6日Epub。
- PubMed ID
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18459799 (在PubMed]
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谷氨酰胺酶属于大总科serine-dependent beta-lactamases penicillin-binding蛋白质,他们促进L-glutamate谷酰胺的水解脱酰氨基作用。在这项工作中,我们纯化和生化特征四个预测谷氨酰胺酶大肠杆菌(这家和YneH)和枯草芽孢杆菌(YlaM和YbgJ)。了严格的特异性的蛋白质谷酰胺,不水解D-glutamine或L-asparagine。在每一个有机体,一个谷氨酰胺酶显示高亲和力谷氨酸盐(这家大肠杆菌和枯草芽孢杆菌YlaM;K m分别为7.3和7.6毫米,比第二个谷氨酰胺酶(YneH大肠杆菌和枯草芽孢杆菌YbgJ;分别为K m 27.6和30.6毫米)。的晶体结构这家大肠杆菌和枯草芽孢杆菌YbgJ揭示古典beta-lactamase-like褶皱的存在和保护的几个关键的催化残基beta-lactamases (Ser74, Lys77, Asn126、Lys268 Ser269 YbgJ)。丙氨酸替代诱变证明大部分的守恒的残留位于假定的谷氨酰胺酶催化部位活动至关重要。YbgJ复杂的晶体结构与谷氨酰胺酶抑制剂6-diazo-5-oxo——l-norleucine透露的抑制剂和羟基氧之间的共价键Ser74,提供证据表明Ser74谷氨酰胺酶反应的主要催化亲核试剂和收益通过组建enzyme-glutamyl中间。与谷氨酰胺酶缺失株大肠杆菌生长实验显示YneH参与同化谷酰胺作为唯一的碳和氮来源和建议都谷氨酰胺酶(这家和YneH)也有助于在大肠杆菌耐酸性。