双官能CobU酶的纯化和表征鼠伤寒沙门氏菌LT2。证据CobU-GMP中间。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
O ' toole GA, Escalante-Semerena JC
双官能CobU酶的纯化和表征鼠伤寒沙门氏菌LT2。证据CobU-GMP中间。
J生物化学杂志。1995年10月6日,270 (40):23560 - 9。
- PubMed ID
-
7559521 (在PubMed]
- 文摘
-
鼠伤寒沙门氏菌的CobU蛋白过表达和纯化大约94%的同质性。氨基端测序的纯化CobU证实第一个22个氨基酸。在体外实验表明,CobU激酶和guanylyltransferase活动,促进从adenosyl-cobinamide adenosyl-cobinamide-GDP的合成,通过一个adenosyl-cobinamide-phosphate中间。我们提出证据证明转让guanylyl一部分三磷酸鸟苷通过phosphoramidate-linked adenosyl-cobinamide-phosphate收益,enzyme-guanylyl中间。在氧气的存在,激酶和guanylyltransferase CobU活动都失去了。治疗与二硫苏糖醇还原活性CobU大约20%的激酶和guanylyltransferase活动,表明酶活性巯基团体的参与。巯基修改代理5、5 ' -dithiobis (2-nitrobenzoic酸)和N-ethylmaleimide废除CobU活动。本地CobU蛋白质二聚体(大约40 kDa)运作最佳pH值在8.8 - -9.0,37度c .基板和活动确定动力学参数。这种酶的首选corrinoid衬底adenosyl-cobinamide。体外实验是符合先前的遗传研究表明,adenosyl-cobinamide CobU的首选衬底,而且CobU运作更有效地在缺乏氧气。