体外重组和分析连锁启动R1128酮化合物合成酶的酶。
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草地,科斯拉C
体外重组和分析连锁启动R1128酮化合物合成酶的酶。
生物化学。2001年12月11日,40 (49):14855 - 61。
- PubMed ID
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11732905 (在PubMed]
- 文摘
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生物合成的碳链骨架R1128物质被认为涉及的活动ketosynthase /链长度系数(ZhuB / ZhuA),额外ketosynthase (ZhuH),一个酰基转移酶(ZhuC),和两个酰基载体蛋白(机场核心计划;ZhuG和准)。这些蛋白质的一个子集启动链之间通过decarboxylative缩合合成一个乙酰基-丙酰-异丁酰-,或butyryl-CoA派生底漆单元和一个malonyl-CoA派生extender单元产生一个乙酰乙酰基,beta-ketopentanoyl, 3-oxo-4-methylpentanoyl,分别或beta-ketohexanoyl-ACP产品。调查的确切角色ZhuH、ZhuC ZhuG,和逸,每个蛋白质在大肠杆菌表达和纯化同质性。虽然此前的报道提出,ZhuC及其同系物扮演了一个角色在底漆单位选择,直接ZhuC体外分析表明,它实际上是一个malonyl-CoA: ACP malonyltransferase(垫)。酶可以催化丙二酰基转移但不是乙酰-或propionyl-transfer R1128 acp或从其他生物合成途径到机场核心计划,这表明ZhuC具有广泛的底物特异性对malonyl-CoA holo-ACP衬底,但具体。因此,ZhuC供应extender单位启动和延伸ketosynthases这个途径。审问ZhuH单位特异性引物,beta-ketoacyl-ACP形成的动力学的各种acyl-CoAs和malonyl-ZhuG测量。Propionyl-CoA和isobutyryl-CoA ZhuH的两个最首选的基质,虽然乙酰辅酶a和butyryl-CoA拉长,也可以接受。这种特异性不仅符合先前的报告证明R1128B和R1128C R1128途径在体内的主要产品,但也在良好的协议与ZhuH衬底的属性绑定的口袋,推导出从最近解决了酶的晶体结构。 Finally, to investigate the molecular logic for the occurrence of not one but two ACP genes within the R1128 gene cluster, the inhibition of ZhuH-catalyzed formation of beta-ketopentanoyl-ACP was quantified in the presence of apo-ZhuG or apo-ZhuN. Both apo-proteins were comparable inhibitors of the ZhuH catalyzed reaction, suggesting that the corresponding apo-proteins can be used interchangeably during chain initiation. Together, these results provide direct biochemical insights into the mechanism of chain initiation of an unusual bacterial aromatic PKS.