特征和净化人类的视黄酸receptor-gamma 1 baculovirus-insect细胞系统中。
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Reddy美联社,陈司法院,Zacharewski T, Gronemeyer H, vooorhees JJ,费舍尔GJ
特征和净化人类的视黄酸receptor-gamma 1 baculovirus-insect细胞系统中。
j . 1992 11月1;287 (Pt 3): 833 - 40。
- PubMed ID
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1332684 (在PubMed]
- 文摘
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人类视黄酸的全长cDNA receptor-gamma 1 (RAR-gamma 1)一直在高水平表达Spodoptera frugiferda (Sf9)细胞利用杆状病毒表达系统。免疫印迹分析表明RAR-gamma 1 32到60 h感染后表达增加。重组受体表达主要是核蛋白质和显示50 kDa的分子质量由SDS /页面和凝胶过滤色谱法,与其cDNA-deduced大小一致。基于配体结合,2 x 10 (6) RAR-gamma 1分子表达/ Sf9细胞,大约水平。在哺乳动物细胞2000倍。受体被连续的阴离子交换部分纯化的300倍,凝胶过滤和DNA亲和色谱法。过表达受体专门绑定all-trans-retinoic酸(RA)和合成维生素a CD367高亲和力(Kd分别为0.15和0.23 nM)。RA代谢产物4-hydroxy-RA和4-oxo-RA可怜的竞争对手[3 h] CD367绑定重组RAR-gamma 1 (K (i) > 1 microM),表明4价的RA大大降低其亲和力RAR-gamma 1。Gel-retardation分析表明RAR-gamma 1具体绑定RA响应鼠标RAR-beta基因的元素。RAR-gamma 1种表达的重组杆状病毒(Sf9细胞)和牛痘病毒(海拉细胞)表现出类似的亲和力RA和CD367在gel-retardation可比dna结合特性实验。 Moreover, a similar requirement for additional DNA-binding stimulatory factor(s) was observed in both cases. These results provide a basis for the use of baculovirus-expressed RAR-gamma 1 in further functional and structural studies.