改善meta-cleavage产品水解酶的催化效率(CumD)荧光假IP01。
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小君SY Fushinobu年代,Nojiri H, Omori T,沾荤腥H, Wakagi T
改善meta-cleavage产品水解酶的催化效率(CumD)荧光假IP01。
Biochim Biophys学报。2006年7月,1764 (7):1159 - 66。Epub 2006年6月7日。
- PubMed ID
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16844437 (在PubMed]
- 文摘
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meta-cleavage产品水解酶的荧光假IP01 (CumD)水解2-hydroxy-6-oxo-7-methylocta-2 4-dienoate HODA) -异丙基因(异丙基苯的降解途径(茴香素)。调节CumD向基板的底物特异性和催化效率来源于单环芳香族化合物,我们构造CumD突变体,A129V, I199V V227I,以及四个类型的突变体的两倍和三倍。向基质与较小的侧链(例如2-hydroxy-6-oxohepta-2 4-dienoate;6-ethyl-HODA)、k(猫)/ k (m)的单值突变体是4.2 -11倍高于野生型酶的1.8 - -4.7倍高于meta-cleavage产品水解酶从假单胞菌putida F1 (TodF)。A129V突变体显示最高的k(猫)/ k (m)值2-hydroxy-6-oxohepta-2, 4-dienoate (6-ethyl-HODA)。A129V突变体的晶体结构决定在1.65一项决议,启用位置Ser103 Ogamma原子的侧链。氯离子是绑定到oxyanion活性部位的孔,和突变酶的残留形成这个网站也被检查。Ser34突变体的k (cat)值下降2.9 -65倍,这表明Ser34支持催化的侧链稳定提出了中间状态的氧阴离子(gem-diolate)。这是第一个晶体结构测定CumD活性形式,Ser103残渣,催化地必不可少的“三合会”之一,被完好无损。