克隆、测序和表达的大肠杆菌tetanomorphum梭状芽胞杆菌基因编码beta-methylaspartase和重组蛋白的特征。
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Goda SK,明顿NP、堵塞NP Gani D
克隆、测序和表达的大肠杆菌tetanomorphum梭状芽胞杆菌基因编码beta-methylaspartase和重组蛋白的特征。
生物化学。1992年11月10日,31 (44):10747 - 56。
- PubMed ID
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1420191 (在PubMed]
- 文摘
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基因编码methylaspartase (EC 4.3.1.2) tetranomorphum梭状芽胞杆菌克隆,测序,大肠杆菌中表达。开放阅读框(ORF)编码413个氨基酸残基的多肽(45539 M (r))的七个半胱氨酸残基。子的大小表明methylaspartase为四聚物而非(AB) 2。推断蛋白质的一级结构没有同源性,酶催化反应或相似,事实上,任何令人信服的同源性特征与其他蛋白质。酶的重组蛋白是相同的孤立直接从c tetanomorphum由若干标准。高度活跃的形式获得的酶(大约70%的天然酶)的活动和迁移作为一个乐队(49000 (r)) SDS-polyacrylamide凝胶。脱氨基作用的动力学参数(2 s, 3 s) 3-methylaspartic酸的自然和重组蛋白非常相似,和蛋白质显示相同的钾ion-dependent主要重氢同位素效应V, V / K (2 s, 3 s)时采用3-methylaspartic酸作为衬底。符合自然酶的活动,重组蛋白能够促进缓慢的形成(2 s, 3 r) 3-methylaspartic酸,自然的L-erythro-epimer衬底,从mesaconic酸和氨。早期工作的半胱氨酸残基在蛋白质被贴上N-ethylmaleimide表示,有八个半胱氨酸残基/蛋白单体。半胱氨酸残基是受底物保护。 Here evidence is forwarded to suggest that the residue that was protected by the substrate is not a cysteine residue but the translation product of a serine codon. Kinetic data indicate that this serine residue may be modified in the active enzyme. The implications of these findings on the mechanism of catalysis are discussed within the context of a few emerging mode of action for methylaspartate ammonia-lyase.