Proton-coupled电子转移催化循环的产碱杆菌属xylosoxidans copper-dependent亚硝酸还原酶。
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Leferink NG Han C, Antonyuk SV,嘿,DJ,里格比,脚腕,伊迪法官明确指出RR, Scrutton NS,哈斯南党卫军
Proton-coupled电子转移催化循环的产碱杆菌属xylosoxidans copper-dependent亚硝酸还原酶。
生物化学,2011年5月17日,50(19):4121 - 31所示。doi: 10.1021 / bi200246f。Epub 2011年4月19日。
- PubMed ID
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21469743 (在PubMed]
- 文摘
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最近我们演示了两个质子参与减少亚硝酸盐通过proton-coupled一氧化氮电子转移(ET)催化反应的蓝色Cu-dependent亚硝酸还原酶(铜NiR)的产碱杆菌属xylosoxidans (AxNiR)。两个公认的质子通道的功能,一个涉及Asn90,另His254,研究了使用单引号(N90S H254F)和双(N90S——H254F)突变体。所有突变体的研究非常活跃,表明质子仍然能够达到活性部位。H254F突变没有影响催化活性,而N90S突变导致~ 70%减少活动。激光闪光光解实验表明,在H254F和野生型酶水平的电子进入T1Cu然后重新分配两个铜之间的网站。完成从T1Cu T2Cu发生只有当亚硝酸盐等结合T2Cu网站。这表明衬底绑定从T1Cu T2Cu促进等,这表明酶有序运作机制。事实上,在N90S N90S H254F变异,T1Cu网站氧化还原电位的升高约60 mV, inter-Cu等只是观察到亚硝酸盐的存在。从这些结果很明显,Asn90 AxNiR通道是主要的质子通道,尽管质子仍然可以达到活性部位是否中断这个通道。这些观察晶体结构提供一个清晰的结构原理,包括恢复质子交付通过一个循环的重要运动连接T1Cu配体Cys130和His139发生亚硝酸盐的绑定。 Notably, a role for this loop in facilitating interaction of cytochrome c(551) with Cu NiR has been suggested previously based on a crystal structure of the binary complex.