探索的结构性基础家庭10木聚糖酶热稳定性的差异显示。
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谢H,弗林特J, Vardakou M, Lakey JH,刘易斯RJ,吉尔伯特HJ, Dumon C
探索的结构性基础家庭10木聚糖酶热稳定性的差异显示。
J杂志。2006年6月30日,360 (1):157 - 67。Epub 2006年5月15日。
- PubMed ID
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16762367 (在PubMed]
- 文摘
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工业上重要的水解酶的耐热性是一个重要的属性:理解这个属性的结构基础支撑未来生物技术开发的生物催化剂。Cellvibrio家庭10 (GH10)木聚糖酶显示相当大的序列的身份但在耐热性表现出显著差异;因此,这些酶代表优秀的模型检查结构基础稳定性的变化显示这些糖苷水解酶。在这里,我们受到了胞内Cellvibrio mixtus木聚糖酶CmXyn10B迫使蛋白质进化。易错PCR和选择确定了双突变体,A334V / G348D,赋予耐热性的增加。突变的Tm 8度高于野生型酶,在55摄氏度,热失活的一阶速率常数A334V / G348D 4.1 x 10(4)分钟(1),而1.6 x 10(1)最小值(1)野生型酶。引入N C端二硫化物桥到A334V / G348D,增加野生型CmXyn10B的耐热性,赋予进一步增加约2摄氏度的Tm双突变体。A334V / G348D的晶体结构表明,引入Val334填补了腔内疏水核心的木聚糖酶,增加范德华相互作用的数量与周围的芳香残留,而O (delta1) Asp348使额外的氢键的酰胺Gly344和O (delta2)与阿拉伯呋喃糖侧链木糖一半的2子。调查生产衬底绑定中木聚糖装饰的重要性,野生型CmXyn10B的活动,突变A334V / G348D,和其他几个GH10木聚糖酶对xylotriose和xylotriose包含一个阿拉伯呋喃糖侧链(AX3)评估。酶是更积极的反对比xylotriose AX3,提供证据表明,阿拉伯糖侧链使底物识别通用贡献由GH10木聚糖酶。