一个快速的解决方案完全氧化双突变体的结构测定K9-10A细胞色素c7从Desulfuromonas acetoxidans和机械的影响。
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Assfalg M,贝尔蒂尼我Turano P Bruschi M,杜兰MC, Giudici-Orticoni MT, Dolla
一个快速的解决方案完全氧化双突变体的结构测定K9-10A细胞色素c7从Desulfuromonas acetoxidans和机械的影响。
J Biomol NMR。2002年2月,22(2):107 - 22所示。
- PubMed ID
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11883773 (在PubMed]
- 文摘
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赖氨酸9日和10日在Desulfuromonas acetoxidans细胞色素c7、可参与的互动机制与氧化还原的合作伙伴,已经被使用定点诱变丙氨酸残基。的解决方案结构完全K9-10A细胞色素c7的氧化形式,与三顺顺磁中心,通过1 h NMR已经确定。光谱的任务是通过一个自动执行程序的算法和策略在这里描述。NOESY谱的任务已经被重新计算进一步扩展NOESY地图。最后的数量有意义NOE-based上距离限制是1186。限制能源最小化计算,147年pseudocontact约束也包括转变,显示与NOE-based约束一致性,因此进一步有助于验证结构质量。最后一个家庭35矫形器与RMSD计算值对结构的平均值是0.69 + / - 0.17和1.05 + / - 0.14的骨干和重原子,分别。的整体折叠分子是保持对本机的蛋白质。循环之间存在第三血红素和血红素IV结果高度无序也在目前的结构尽管其整体形状主要类似于氧化天然蛋白,和两条链产生短的β褶板出席的n端和连接由一个包含变异的残留物,不太明确。如果忽视这个循环,RMSD值是0.52 + / - 0.07和0.92 + / - 0.06的骨干和重原子,分别代表一个合理的解决。 The relative distances and orientations of the three hemes are maintained, as well as the orientation of the imidazole rings of the axial histidine ligands, with the only exception of heme IV. Such difference probably reflects minor conformational changes due to the substitution of the vicinal Lys 10 with an Ala. The replacement of the two lysines does not affect the reduction potentials of the three hemes, consistently with the expectations on the basis of the structure and electrostatic calculations. However, the replacement of the two lysines affects the reactivity of the mutant cytochrome c7 with [Fe] hydrogenase, inducing a change in Km. This finding is in agreement with the identification of the protein area around heme IV as the interacting site.