一般的酸/碱的pKa羧基的糖苷酶在催化循环:色谱仪研究芽孢杆菌circulans木聚糖酶。
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麦金托什LP, G,约翰逊PE、医学博士Joshi Korner M, Plesniak洛杉矶,Ziser L, Wakarchuk WW,威瑟斯SG
一般的酸/碱的pKa羧基的糖苷酶在催化循环:色谱仪研究芽孢杆菌circulans木聚糖酶。
生物化学。1996年8月6日,35 (31):9958 - 66。
- PubMed ID
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8756457 (在PubMed]
- 文摘
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20 kDa的木聚糖酶芽孢杆菌circulans执行通过两步水解木聚糖的机制涉及共价glycosyl-enzyme中间。复分解反应,Glu78函数作为亲核试剂形成中间,虽然Glu172充当一般酸催化剂在糖基化,使质子化的糖苷配基,然后在deglycosylation一般基础,deprotonating攻击水。Glu172地方特定要求的双重角色电离状态,因此pKa值。色谱仪滴定的木聚糖酶,贴上delta-13C谷氨酸,揭示了pKa值的4.6和6.7 Glu78 Glu172,分别。这些明显的pKa值吻合较好获得kcat / Km对pH值的依赖关系的研究表明,在酶的最佳pH值为5.7,亲核试剂Glu78 deprotonated和一般酸Glu172最初质子化了的。值得注意的是,被困的pKa Glu172降到4.2共价glycosyl-enzyme中间,由反应2 ',4 ' -dinitrophenyl 2-deoxy-2-fluoro-beta-xylobioside[苗族et al .(1994)生物化学33岁,7027 - 7032]。类似的测量pKa Glu172谷氨酰胺时出席78年位置。这个大pKa下降约2.5个单位的角色是一致的Glu172一般基催化剂在deglycosylation一步,似乎都减少静电排斥的结果由于中和Glu78和蛋白质的构象变化。这种“pKa循环”在催化糖苷酶可能是一个常见的现象。