链黴菌洋兰酶氟化的机制。
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朱X,罗宾逊哒,麦克尤恩AR,欧哈根D,奈史密斯JH
链黴菌洋兰酶氟化的机制。
J是化学Soc。2007年11月28日,129 (47):14597 - 604。Epub 2007年11月7日。
- PubMed ID
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17985882 (在PubMed]
- 文摘
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最近从链霉菌属氟化酶被确认和孤立洋兰,作为第一个关键步骤在氟化代谢物的代谢途径,fluoroacetate 4-fluorothreonine。这种酶5‘-fluoro-5脱氧腺苷合成酶(上述),已经被证明可以促进氟键形成的氟离子的亲核攻击S-adenosyl-l-methionine (SAM)的伴随的位移l-methionine生成5‘-fluoro-5脱氧腺苷酸(5 ' fda)。虽然上述的结构绑定到山姆和产品都被解决,分子机制仍然是阐明。我们现在报告定点诱变研究中,结构分析,和等温量热法(ITC)实验。所需的数据建立的关键残基催化和衬底的顺序绑定。从水中氟离子不容易区分蛋白质x射线结晶学;然而,使用氯离子(也是一个衬底)突变体的低活动使得卤离子位于非生产性co-complexes SAH和山姆。山姆的动力学数据表明带正电的硫是一个关键的要求在稳定的过渡状态。我们提出的分子机制的上述氟弱关联与酶交换两个水分子蛋白质结扎。山姆驱赶剩余水的绑定与氟离子和陷阱一个口袋里的离子将与山姆反应,生成l-methionine和5 ' fda。 l-methionine then dissociates from the enzyme followed by 5'-FDA.