胱硫醚的净化和属性gamma-synthase从高产菌株大肠杆菌。
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霍尔布鲁克EL,格林RC,克鲁格JH
胱硫醚的净化和属性gamma-synthase从高产菌株大肠杆菌。
生物化学,1990年1月16日,29 (2):435 - 42。
- PubMed ID
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2405903 (在PubMed]
- 文摘
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的甲硫氨酸生物合成的酶胱硫醚gamma-synthase从大肠杆菌,我们构建了高拷贝数质粒含有metB结构基因但缺乏metJ监管基因密切相关。当克隆到一个适当的压力,这些质粒可以直接胱硫醚的生产过剩gamma-synthase这样大约10%的可溶性蛋白质是这种酶。beplayapp科学家发明了一种有效的净化方案,使我们获得克量的酶。亚基的活性形式是四聚物约40000道尔顿,每个单体一磷酸吡哆醛代数余子式。beplayapp几个酶催化反应的动力学常数测定25度c的Km值消去反应与O-succinyl-L-homoserine计算是0.33毫米,最大速度460最低为1。消除(脱氨基作用)反应的公里vinylglycine 5.6毫米的最大速度900最低为1。置换反应的Km值计算为O-succinyl-L-homoserine 1.0毫米和0.05毫米的l - 700最低为1的最大速度。酶显示了一个吸收带在422 nm(ε= 8463 m - 1 cm - 1)由磷酸吡哆醛席夫碱形式的代数余子式。稳态光谱反应复合物显示外观的新长波长吸收材料与O-succinyl-L-homoserine反应期间,vinylglycine或vinylglycine和半胱氨酸。反应O-succinyl-L-homoserine和半胱氨酸生产只有红移和轻微的减少乐队在422海里。