Structure-stability-activity关系分子共价交联N-carbamoyl酸酰胺水解酶和N-acylamino酸消旋酶。
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赵WC,你享有,刘JS,许SK,许WH, Shih CH,黄JK,王WC
Structure-stability-activity关系分子共价交联N-carbamoyl酸酰胺水解酶和N-acylamino酸消旋酶。
J杂志。2006年6月9日,359(3):741 - 53年。Epub 2006年4月18日。
- PubMed ID
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16650857 (在PubMed]
- 文摘
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N-Acylamino酸消旋酶(NAAAR)和N-carbamoyl-D-amino-acid酰胺水解酶(D-NCAase)是重要的生物催化剂生产enantiopure alpha-amino酸。NAAAR形成了octameric组装并显示诱导契合运动在衬底绑定,而D-NCAase四聚物,不会改变构象配体的存在。调查的影响引入潜在稳定s桥梁在这些不同的multimeric酶、半胱氨酸残基形成预测国际米兰或二硫化intra-subunit债券介绍了定点诱变。Inter-subunit s债券形成的两个NAAAR变体(A68C-D72C和P60C-Y100C)和两个d-NCAase变体(A302C和P295C-F304C)。Intra-subunit s债券形成的两个附加NAAAR变体(E149C-A182C和V265C)。晶体结构NAAARs变异显示有限的偏离野生型整体三级结构。apo A68C-D72C亚基不同于野生型酶,它有一个命令控制循环,像配体NAAAR。A222C的结构和A302C D-NCAases是野生型酶几乎相同。所有突变体inter-subunit桥梁在热稳定性增加。与野生型酶相比,A68C-D72C NAAAR kcat /公里比率显示相似,而突变D-NCAases证明增加kcat /公里比率在高温下(A302C: 4.2倍在65摄氏度)。此外,分子动态模拟显示,A302C大大支撑调整催化部位随着温度的增加,达到增强活动。