稳定和活动改善头孢菌素酯酶从洋葱剑兰EstB定向进化和结构突变蛋白质的解释。
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Valinger G,赫尔曼·M,瓦格纳UG,施瓦布H
稳定和活动改善头孢菌素酯酶从洋葱剑兰EstB定向进化和结构突变蛋白质的解释。
生物科技J》。2007年3月30日,129 (1):98 - 108。Epub 2006 10月20。
- PubMed ID
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17137667 (在PubMed]
- 文摘
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酯酶EstB洋葱剑兰,这属于一个家庭相关的酯酶beta-lactamases和DD-peptidases进化同时增加稳定和保持较高的头孢菌素C脱乙酰作用的活动。随机诱变PCR用于生成5每个基因aa替换。新设计的殖民地filter-screening化验,这是基于pH值变化后的脱乙酰作用头孢菌素C的DMF成立。在第一轮进化采用随机诱变,其中包括大约10(6)突变体,一组有趣的突变体是孤立的。beplayapp不同的突变确定为重要的稳定是通过理性的重组步骤和由此产生的重组进一步通过一个额外的随机突变。筛选后额外的10(5)克隆,可以隔离的一个变体EstB拥有超过100倍更好的活动包含35% DMF反应。这个突变也显示增加高温度稳定性(T (m)提出的13摄氏度)和保留高活动在标准试验条件下对头孢菌素C。突变中随机突变体的分子影响的观点讨论了野生型EstB的三维结构。