反相的选择性伯克剑兰酯酶EstB通过定向进化和设计。
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Ivancic M, Valinger G,格鲁伯K,施瓦布H
反相的选择性伯克剑兰酯酶EstB通过定向进化和设计。
生物科技J》。2007年3月30日,129(1):109 - 22所示。Epub 2006 10月20。
- PubMed ID
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17147964 (在PubMed]
- 文摘
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酯酶EstB从洋葱剑兰,显示中度S-enantioselectivity (E (S) = 6.1)的水解动力学分辨率methyl-beta-hydroxyisobutyrate,受到定向进化,以扭转其选择性。ep-PCR一轮后,饱和突变和大规模筛选,发现不同的突变位置152(附近的活性部位)增加,减少,甚至扭转这种酶的自然选择性。新创建的R-enantioselectivity酯酶的突变蛋白质(E (Rapp) = 1.5)设计进一步提高了进化策略涉及随机突变接近活性部位。基于三维结构的19个氨基酸残基被选择作为饱和突变的突变网站。突变的三处(135年、253年和351年)被发现增加R-enantioselectivity。一轮轮的饱和突变在这些“热点”导致增加R-enantioselectivity从E (Rapp) = 1.5为父突变E (Rapp) = 28.9最好的变体进行四个氨基酸替换。我们的结果证明设计的进化之后,大规模筛选是一个有效的工程酶选择性战略。