5000倍增加特异性的细菌phosphotriesterase马拉松通过组合活性位点突变。
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纳T,监狱长AC,法国N, Sugrue E,卡尔PD,杰克逊CJ,斯科特·C
5000倍增加特异性的细菌phosphotriesterase马拉松通过组合活性位点突变。
《公共科学图书馆•综合》。2014年4月10日,9 (4):e94177。doi: 10.1371 / journal.pone.0094177。eCollection 2014。
- PubMed ID
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24721933 (在PubMed]
- 文摘
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Phosphotriesterases (pt)已经从一系列孤立的细菌物种,包括Agrobcaterium radiobacter (PTEAr)是有效的酶和底物范围广阔。常见的有机磷杀虫剂的PTEAr周转率马拉松低于预期是基于它的物理性质;主要的pka离去基团。在这项研究中,我们合理化PTEAr马拉松使用周转率计算对接的底物酶的高分辨率的晶体结构,这表明马拉松PTEAr绑定的口袋太大。蛋白质工程通过组合活性部位饱和度测试(铸造)被用来增加马拉松营业额。变异从铸造库Ser308和Tyr309突变产生了变异,对马拉松活动增加。最活跃的PTEAr变体进行Ser308Leu Tyr309Ala替换,导致一个ca。5000倍增加kcat /公里马拉松。x射线晶体结构的PTEAr Ser308Leu \ Tyr309Ala变体证明访问绑定口袋被取代笨重的增强Tyr309残留小丙氨酸残基。