炭疽芽孢杆菌二氢叶酸还原酶的功能克隆及甲氧苄啶天然耐药性的证实。
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Barrow EW, Bourne PC, Barrow WW
炭疽芽孢杆菌二氢叶酸还原酶的功能克隆及甲氧苄啶天然耐药性的证实。
抗菌药物与化学，2004;48(12):4643-9。
- PubMed ID
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15561838 (PubMed视图］
- 摘要
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据报道，炭疽芽孢杆菌对甲氧苄啶(TMP)具有天然耐药性，甲氧苄啶是一种抑制叶酸途径中的关键酶二氢叶酸还原酶(DHFR)的药物。微量稀释肉汤试验证实，TMP对炭疽芽孢杆菌的MIC为bb0 2048，但<或= 4096微克/毫升。从炭疽芽孢杆菌基因组DNA中扩增出推测的DHFR序列。将PCR产物克隆到Invitrogen pCRT7/CT-TOPO载体中，转化到大肠杆菌TOP10F化学感受态细胞中。从克隆的PCR产物末端下游连接有凝血酶裂解位点的正确结构的克隆质粒DNA转化到大肠杆菌BL21 Star (DE3)pLysS感受态细胞中，用于表达6组氨酸标记的融合蛋白，并在His-Bind树脂柱上纯化。纯化的Sterne重组DHFR (Sterne rDHFR)的功能在建立的酶分析中得到证实。TMP和甲氨蝶呤对Sterne rDHFR的50%抑制浓度分别为77233 nM和12.2 nM。用Sterne DHFR基因转化的大肠杆菌BL21 Star (DE3)pLysS感受态细胞观察TMP耐药性。对Sterne DHFR基因的氨基酸序列比对显示，该基因与炭疽芽孢杆菌的多种毒力菌株同源性为100%。这些结果证实了炭疽芽孢杆菌对TMP的天然抗性，并阐明了这种抗性与染色体编码基因产物缺乏选择性有关。 These findings will assist in the development of narrow-spectrum antimicrobial agents for treatment of anthrax.