互变异构的半反应BphD,碳碳键水解酶。动力学和结构的证据支持一个组氨酸265催化三分子的关键作用。
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Horsman GP Bhowmik年代,Seah SY,库马尔P,柏林JT, Eltis LD
互变异构的半反应BphD,碳碳键水解酶。动力学和结构的证据支持一个组氨酸265催化三分子的关键作用。
生物化学杂志。2007年7月6日,282 (27):19894 - 904。Epub 2007年4月18日。
- PubMed ID
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17442675 (在PubMed]
- 文摘
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BphD的洋葱xenovorans LB400 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2催化一个不寻常的碳碳键水解,4-dienoic酸(HOPDA)负担苯甲酸和2-hydroxy-2 4-pentadienoic酸(HPD)。一个enol-keto互变异构化提出了通过gem-diol先于水解中间产物。规范的作用催化三分子(ser - 112, - 265, asp - 237)在调停这两个半反应尚不清楚。我们之前报道的BphD-catalyzed水解HOPDA(λ(max)是434海里自由烯醇化物)通过一个身份不明的中间收益红移吸收光谱(λ(max)是492海里)(Horsman, g P。柯,J。戴,S。Seah郑胜耀K。柏林时,j . T。,Eltis l . d .(2006)生物化学45岁,11071 - 11086)。我们证明S112A变异生成和陷阱类似的中间(λ(max)是506海里)相似率,1 /τ大约500 (1)。复杂的晶体结构S112A: HOPDA 1.8 a分辨率识别中间酮互变异构体,(E) 2, 6-dioxo-6-phenyl-hex-3-enoate。这酮互变异构体没有积聚在H265A或S112A / H265A双变异,表明他- 265催化互变异构化。 Consistent with this role, the wild type and S112A enzymes catalyzed tautomerization of the product HPD, whereas H265A variants did not. This study thus identifies a keto intermediate, and demonstrates that the catalytic triad histidine catalyzes the tautomerization half-reaction, expanding the role of this residue from its purely hydrolytic function in other serine hydrolases. Finally, the S112A:HOPDA crystal structure is more consistent with hydrolysis occurring via an acyl-enzyme intermediate than a gem-diol intermediate as solvent molecules have poor access to C6, and the closest ordered water is 7 A away.