假单胞菌的克隆、测序和表达putida protocatechuate 3 4-dioxygenase基因。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
Frazee RW,利文斯顿DM,拉波特,以至于JD
假单胞菌的克隆、测序和表达putida protocatechuate 3 4-dioxygenase基因。
J Bacteriol。1993年10月,175 (19):6194 - 202。
- PubMed ID
-
8407791 (在PubMed]
- 文摘
-
α和β亚基的基因编码protocatechuate 3 4-dioxygenase (3, 4-PCD [EC 1.13.11.3])都从假单胞菌克隆putida(原名铜绿假单胞菌)(写明ATCC 23975)λ噬菌体的基因组文库的准备。斑块被与退化寡核苷酸杂交筛选设计使用已知的氨基酸序列。1.5 kb SmaI片段从15 kb subcloned初级克隆,测序,并包含两个连续的开放阅读框架,指定pcaH pcaG,相应的β和α亚基,分别4-PCD。推导的氨基酸序列从pcaHG匹配的化学确定序列3 4-PCD除了三个职位。克隆pcaHG成broad-host-range表达载体pKMY319允许在p . putida株高水平的表达,以及具体归纳后变形杆菌plasmid-encoded nahG启动子与水杨酸。重组酶的纯化和结晶p .奇异君子兰4-PCD缺乏内生的3。物理、光谱和动力学性质的重组酶与野生型的酶是没有区别的。此外,相同的瞬态中间体形成酶在催化循环。这些研究建立的方法将允许追求机械的调查通过定点诱变p putida 3 4-PCD,唯一的芳香ring-cleaving加双氧酶的三维结构。