UDP-3-O-acyl-GlcNAc脱乙酰酶的克隆、表达和纯化绿脓假单胞菌:metalloamidase脂类的生物合成途径。
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海兰德SA Eveland党卫军,安德森女士
UDP-3-O-acyl-GlcNAc脱乙酰酶的克隆、表达和纯化绿脓假单胞菌:metalloamidase脂类的生物合成途径。
J Bacteriol。1997年3月,179 (6):2029 - 37。
- PubMed ID
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9068651 (在PubMed]
- 文摘
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lpxC (envA)基因的大肠杆菌编码UDP-3-O-acyl-GlcNAc脱乙酰酶,第二和脂多糖生物合成的关键步骤。尽管存在于所有革兰氏阴性细菌检查,脱乙酰酶的大肠杆菌是唯一的例子,这种酶表达和纯化。为了研究这种蛋白质的其他变体,我们克隆铜绿假单胞菌脱乙酰酶的结构基因从一个λ库作为5.1 kb EcoRI片段。LpxC阅读框编码一个推断蛋白质的33435 Da高度同源的大肠杆菌的蛋白质,具有几乎相同的水疗法。为了验证功能,我们subcloned铜绿假单胞菌lpxC基因向量pET11a T7-based表达式。在感应在30摄氏度,这种构造了活性蛋白质大约18%的可溶性分数。我们设计了一个新的、快速和可再生的试验的脱乙酰酶促进纯化酶的三个步骤。纯化的重组蛋白被发现对EDTA高度敏感而被激活的多余的重金属,是原油提取的铜绿假单胞菌。相比之下,脱乙酰酶活动原油提取大肠杆菌对EDTA, envA1突变体的提取和敏感时间的方式。lpxC基因序列与酰胺酶没有明显的同源性签名。 Therefore, we assign this protein to the metalloamidase family as a member with a novel structure.