综合功能的地图的antigen-binding网站anti-ErbB2抗体用猎枪扫描诱变。
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Vajdos FF,亚当斯CW Breece TN, Presta LG、de Vos, Sidhu党卫军
综合功能的地图的antigen-binding网站anti-ErbB2抗体用猎枪扫描诱变。
J杂志。2002年7月5日,320 (2):415 - 28。
- PubMed ID
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12079396 (在PubMed]
- 文摘
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猎枪扫描组合诱变是用于研究Fab2C4 antigen-binding网站,人源化单克隆抗体片段结合到细胞外领域的人类致癌基因ErbB2的产品。基本上所有的残留物Fab2C4互补决定区(CDRs) alanine-scanned优先使用phage-displayed库,允许侧链不同野生型或丙氨酸。执行一个单独的homolog-scan使用库只允许侧链不同野生型或类似的氨基酸残基。绑定选择隔离功能克隆后,DNA测序被用来确定野生型和突变体的比例在每个不同的位置,而这些比率是用来评估每个侧链抗原绑定的贡献。alanine-scan显示大部分的侧链导致抗原绑定位于重链,和Fab2C4三维结构显示,这些残留物分为两组。第一组包括solvent-exposed残留这可能使积极接触抗原,从而构成了functional-binding抗原决定基。第二组包括埋残留与侧链包对其他CDR残留物,显然作为脚手架保持功能binding-competent构象表位。涉及的homolog-scan微妙的突变,因此,只有一个子集的侧链是不宽容的丙氨酸替换也不能容忍同源替换。特别是610 A2功能性抗原决定基表面了alanine-scanning缩减到只有369 A2与同源替换映射时,表明这种侧链的小子集可能参与更精确的与抗原接触。结果验证猎枪扫描作为一种快速、准确的方法来确定个体侧链的功能贡献参与蛋白质的相互作用。