枸橼酸杆菌属的晶体结构freundii酪氨酸phenol-lyase包裹着3 -(4 '羟苯基)丙酸和定点诱变和动力学分析,表明精氨酸381所需底物特异性。
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Sundararaju B, Antson AA,菲利普斯RS, Demidkina电视,Barbolina MV, Gollnick P,道森GG,威尔逊KS
枸橼酸杆菌属的晶体结构freundii酪氨酸phenol-lyase包裹着3 -(4 '羟苯基)丙酸和定点诱变和动力学分析,表明精氨酸381所需底物特异性。
生物化学。1997年5月27日,36 (21):6502 - 10。
- PubMed ID
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9174368 (在PubMed]
- 文摘
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酪氨酸的x射线结构phenol-lyase (TPL)与衬底模拟混合时,3 -(4 '羟苯基)丙酸,表明参数381位于底物结合位点,与侧链NH1 4.1从4的模拟-哦。结构已经推导出分辨率2.5使用晶体属于P2(1) 2(1)空间群= 135.07 A, b = 143.91 A, c = 59.80。评估381年Arg TPL催化的作用,我们准备好的突变蛋白取代精氨酸和丙氨酸(R381A),与缬氨酸和异亮氨酸(R381I), (R381V)。R381A TPL的beta-elimination活动已经减少了10(4)倍与野生型相比,而R381I和R381V TPL展览没有检测到beta-elimination活动以酪氨酸为底物。然而,R381A R381I, R381V TPL与S - (o-nitrophenyl) -L-cysteine反应,beta-chloro-L-alanine O-benzoyl-L-serine, S-methyl-L-cysteine和展览k (cat)和k (cat)值与野生型的TPL /公里。此外,竞争性抑制的Ki值由左旋色氨酸和L-phenylalanine为野生型类似,R381A, R381I TPL。Rapid-scanning-stopped流光谱分析还表明,野生型和突变体蛋白可以绑定酪氨酸,形成醌型的复合物与类似的速率常数。绑定的3 -(4 '羟苯基)丙酸在高pH值与野生型TPL减少8.4,因此依赖的pKa酸性组,可能Arg404,形成的离子对模拟羧酸盐,或吡哆醛5 '磷酸席夫碱。R381A TPL只显示小k (cat) /公里减少酪氨酸在低pH值,与野生型相比TPL,显示两个基本pka平均约7.8的价值。beplayapp因此,Arg 381可能是一种催化基地之前观察到k对pH值的依赖关系(cat) /公里的TPL酪氨酸(Kiick, d . M。&菲利普斯。 R. S. (1988) Biochemistry 27, 7333-7338], and hence Arg 381 is at least partially responsible for the substrate specificity of TPL.