人过氧化物酶体酰基辅酶a氧化酶在昆虫细胞中的过表达及特性研究。
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朱瑞，Varanasi U, Chu S, Lin Y, Usuda N, Rao MS, Reddy JK
人过氧化物酶体酰基辅酶a氧化酶在昆虫细胞中的过表达及特性研究。
生物化学学报，1995,3;27(9):498 - 498。
- PubMed ID
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7876265 (PubMed视图］
- 摘要
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人肝脏过氧化物酶体含有两种酰基辅酶a氧化酶，即棕榈酰辅酶a氧化酶和支链酰基辅酶a氧化酶。棕榈酰辅酶a氧化酶(ACOX)氧化直链脂肪酸和前列腺素的辅酶a酯，并将电子直接提供给分子氧，从而产生H2O2。通过过氧化物酶体增殖体在大鼠和小鼠肝脏中诱导产生h2o2的ACOX，以及由此产生的氧化应激在肝癌发生中的假设作用，引起了人们对人类ACOX结构和功能特征的兴趣。我们构建了全长cDNA编码660个氨基酸残基的人ACOX蛋白，并利用杆状病毒载体在frugiperda (Spodoptera frugiperda, Sf9)昆虫细胞中高产出具有催化活性的人ACOX蛋白。免疫印迹分析表明全长72-kDa多肽(成分A)被部分加工成51-kDa(成分B)和21-kDa(成分C)产物。重组蛋白(约20mg /l × 10(9)个细胞)在镍-硝基-三乙酸亲和柱上一步纯化至均质。使用纯化酶，发现棕榈酰辅酶a的Km和Vmax值分别为10微米和1.4单位/毫克蛋白质。C12-18底物对饱和脂肪酸的活性最大。免疫细胞化学染色在昆虫细胞质中鉴定出过表达的人ACOX蛋白。截断的ACOX 51-kDa(组分B)或21-kDa(组分C)的单独表达都显示缺乏酶活性，但与表达组分B和C的重组病毒共同感染昆虫细胞导致形成具有酶活性的异二聚体B+C复合物，该复合物随后可通过洗涤剂解离而失活。