定点诱变研究EcoRV限制性内切核酸酶识别区域参与识别和催化作用。
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Thielking V, Selent U,科勒E,狼H,派普U,盖革R, Urbanke C,温克勒颗,Pingoud
定点诱变研究EcoRV限制性内切核酸酶识别区域参与识别和催化作用。
生物化学。1991年7月2;30(26):6416 - 22所示。
- PubMed ID
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1647200 (在PubMed]
- 文摘
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指导下的x射线结构分析晶体EcoRV-d (GGGATATCCC)复杂(温克勒,准备),我们已经开始识别功能EcoRV的重要氨基酸残基。这里显示,Asn70 Asp74、Ser183 Asn185, Thr186,和Asn188最有可能参与DNA的绑定和/或劈理,因为他们的保守替换导致突变体或强烈减少活动。此外,似乎EcoRV c端氨基酸残基的重要活动,因为他们删除使酶失去活性。识别后的三个功能重要的地区,我们有检查其他限制和修饰酶的序列同源区域。发现两种限制性内切酶识别序列类似EcoRV (DpnII和HincII),以及两个修饰酶(M。DpnII,在一个不太明显的形式,M.EcoRV),主题-SerGlyXXXAsnIleXSer序列——共同点,在EcoRV包含基本Ser183和Asn188残留。此外,c端区域,显示为EcoRV至关重要,是高度限制性内切核酸酶同源类似地区SmaI。这些研究结果的基础上,我们建议这些限制性内切酶,在一定程度上也相应修改的一些酶与DNA以类似的方式进行交互。