基于cytosol-depleted细胞重构系统研究磷脂酶D的监管。
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Fensome-Green,科克罗夫特
基于cytosol-depleted细胞重构系统研究磷脂酶D的监管。
方法杂志。2006;332:299 - 310。
- PubMed ID
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16878701 (在PubMed]
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磷脂酶D(骑士)水解磷脂酰胆碱生产膜相关第二信使,磷脂酸(PA)和胆碱。两个磷脂酶D酶——PLD1和PLD2——已确定,虽然他们的监管机制尚未完全清楚。研究骑士的规定,我们建立了一个调整系统,允许骑士酶在本国的研究环境,使细胞溶质被操控。与细菌细胞permeabilized溶细胞素(链球菌溶血素O),在质膜产生病变,导致胞质蛋白的释放。随着透化作用时间、鸟苷5 ' -三磷酸(gamma-thio)和receptor-activated骑士活动减少。一旦条件建立了响应的破败,细胞因子,如细胞溶质和纯化蛋白质,可以添加到这些细胞恢复活动。除了检查骑士活动,调整系统允许潜在细胞目标考评的研究,如磷脂酰肌醇4-phosphate (PIP) 5-kinase活动通过监测PIP2合成、功能输出,如胞外分泌。