对siRNA特异性的重新检查质疑PICH和Tao1在纺锤体检查点中的作用，并确定Mad2是小rna的敏感靶标。
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胡布纳NC，王丽莲，Kaulich M, Descombes P, Poser I, Nigg EA
对siRNA特异性的重新检查质疑PICH和Tao1在纺锤体检查点中的作用，并确定Mad2是小rna的敏感靶标。
染色体学报，2010,29(2):149-65。doi: 10.1007 / s00412 - 009 - 0244 - 2。Epub 2009年11月11日
- PubMed ID
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19904549 (PubMed视图]
- 摘要
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dna依赖性腺苷三磷酸酶(ATPase) plk1相互作用检查点解旋酶(PICH)最近被认为与纺锤体检查点(SAC)信号传导有关(Baumann et al.， Cell 128(1):101-114, 2007)。siRNA对PICH的损耗使SAC消失，并导致Mad2在着丝点上的明显选择性损失，这表明PICH在Mad1-Mad2相互作用的调节中起作用。PICH在PICH-贫细胞中的过表达对SAC功能的明显拯救最初似乎证实了PICH在SAC中的作用。然而，我们随后发现，所有pich导向的siRNA寡核苷酸也会减少Mad2 mRNA和蛋白的表达。这种减少在功能上是显著的，因为PICH siRNA不会在含有细菌人工染色体驱动小鼠Mad2表达的细胞系中消除SAC活性。此外，我们发现了几种siRNA双链，它们可以有效地消耗PICH，但不会显著影响SAC功能或Mad2丰度或定位。最后，我们发现过表达的PICH在PICH缺失的细胞中恢复SAC活性的能力取决于有丝分裂激酶Plk1的隔离，而不是PICH的atp酶活性，这指出了“旁路抑制”的潜在机制。为了支持这一观点，Plk1的耗尽或抑制也挽救了Mad2水平低的细胞中的SAC活性。这一观察结果表明，Plk1活性的降低部分补偿了Mad2水平的降低，并认为Plk1通常会降低SAC信号的强度。总的来说，我们的研究结果质疑了PICH在SAC中的作用，而是确定了Mad2是小RNA双链的敏感脱靶。 In support of the latter conclusion, our evidence suggests that an off-target effect on Mad2 may also contribute to explain the apparent role of the Tao1 kinase in SAC signaling.