定向进化方法的结构基因组学项目:Rv2002结核分枝杆菌。
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女士杨JK,公园,Waldo GS Suh西南
定向进化方法的结构基因组学项目:Rv2002结核分枝杆菌。
《美国国家科学院刊S a . 2003年1月21日,100 (2):455 - 60。Epub 2003 1月10。
- PubMed ID
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12524453 (在PubMed]
- 文摘
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结构基因组学项目的严重瓶颈之一是超表达目标蛋白质的可溶性形式。我们申请了定向进化技术,准备结核分枝杆菌Rv2002基因产物的可溶性突变体,被表达的野生型大肠杆菌的包涵体。三突变I6TV47MT69K (Rv2002-M3)选择结构和功能特征。酶化验表明,Rv2002-M3蛋白具有很高的催化活性NADH-dependent 3α,20 beta-hydroxysteroid脱氢酶。我们已经确定一个二进制的晶体结构复杂的NAD(+)和三元复杂雄甾酮和NADH。结构表明,Asp-38决定了辅因子特异性。催化部位包括三和弦ser - 140 -酪氨酸- 153 -赖氨酸- 157。此外,它有一个不寻常的特性,glu - 142。Rv2002-M3 E142A突变的酶化验表明,glu的赖氨酸- 157 - 142逆转效应影响的pKa酪氨酸- 153。本研究表明,Rv2002 SDR的基因产物是一个独特的家人和可能参与类固醇代谢在结核分枝杆菌。 Our work demonstrates the power of the directed evolution technique as a general way of overcoming the difficulties in overexpressing the target proteins in soluble form.