碳碳水解酶的鉴定结核分枝杆菌参与胆固醇代谢。
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缺乏NA,山药KC,劳艾德,Horsman GP,欧文RL, Sim E Eltis LD
碳碳水解酶的鉴定结核分枝杆菌参与胆固醇代谢。
生物化学杂志。2010年1月1;285 (1):434 - 43。doi: 10.1074 / jbc.M109.058081。Epub 2009年10月29日。
- PubMed ID
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19875455 (在PubMed]
- 文摘
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最近发现的胆固醇分解代谢的通路的结核分枝杆菌,2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2, 4-dienoate水解酶(HsaD)提出了催化碳碳键的水解4,5 - 9,10-diseco-3-hydroxy-5, 9日17-tri-oxoandrosta-1 (10), 2-diene-4-oic酸(DSHA),胆固醇meta-cleavage产品(MCP)和已经涉及到细胞内病原体的生存。特异性高,纯化HsaD证明4-33倍为DSHA (k (cat) / k (m) = 3.3 + / - 0.3 x 10 m(1)(4)(1))比联苯MCP 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2, 4-dienoic酸(HOPDA)和合成模拟8 - (2-chlorophenyl) 2-hydroxy-5-methyl-6-oxoocta-2 4-dienoic酸(HOPODA),分别。HsaD S114A变体,在活性部位与丙氨酸,丝氨酸被替换下场是催化地受损和绑定DSHA K (d) 51 + / - 2妈妈。S114A。DSHA物种吸收最大在456 nm, 60 nm红移与DSHA烯醇化物。晶体结构的变异与HOPDA复杂,HOPODA或DSHA 1.8 - -1.9 Aindicate,这种转变是由于enzyme-induced烯醇化物的应变。这些数据表明,催化丝氨酸催化互变异构化。这个残留的第二个角色是由溶剂分子的位置在所有结构的激活的丝氨酸亲核攻击的衬底。最后,α螺旋盖子覆盖活动网站显示ligand-dependent构象变化涉及不同的侧链碳的位置6.7,支持two-conformation酶机制。总的来说,这些结果的决定因素提供新颖的见解在分枝杆菌cholesterol-degrading特异性酶以及MCP水解酶的机制。