组氨酸配体的识别的双核的金属中心phosphotriesterase定点诱变。
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郭JM, Raushel调频
组氨酸配体的识别的双核的金属中心phosphotriesterase定点诱变。
生物化学。1994年4月12日,33 (14):4265 - 72。
- PubMed ID
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8155644 (在PubMed]
- 文摘
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为了确定哪些的七个组氨酸在phosphotriesterase参与酶的活性位点/双核的金属中心,定点诱变是用来改变,分别,每七个组氨酸残基天冬酰胺。此外,野生型酶的基因已经subcloned没有领袖后面修改的核糖体结合位点序列,导致蛋白表达增加了5倍。七个突变体、H55N H57N、H123N H201N, H230N, H254N H257N,表现出不同程度的活动比野生型酶。H123N和H257N突变体和野生型酶一样活跃,但所有其他的突变酶10%或更少的活动。cobalt-purified的金属含量突变体酶已经决心要小于野生型酶在所有情况下。每个突变酶已被转换为酶蛋白和重组2枚锌(II)、镉(II),或钴(II)。动力学参数,和V /公里,和明显的pKa的确定每个重组酶的衍生品。在几乎所有情况下,明显的pKa的转向高价值。ph值配置文件的一些重组突变体酶是明显不同于野生型酶,这表明其他组织可能参与的反应机理在突变组氨酸残基天冬酰胺。他- 123是唯一的组氨酸残基,似乎没有参与phosphotriesterase的催化活性。(抽象截断在250字)