质谱表征人类N-acylethanolamine-hydrolyzing酸酰胺酶。
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公里,西JM Zvonok N, Whitten)木JT,马克里扬尼斯
质谱表征人类N-acylethanolamine-hydrolyzing酸酰胺酶。
J蛋白质组研究》2012年2月3日,11 (2):972 - 81。doi: 10.1021 / pr200735a。Epub 2012年1月3。
- PubMed ID
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22040171 (在PubMed]
- 文摘
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N-Acylethanolamine-hydrolyzing酸酰胺酶(NAAA)是一种溶酶体酶,主要降解palmitoylethanolamine(豌豆)、脂肪酰胺,抑制炎症反应。我们开发了一个HEK293细胞线稳定表达NAAA pro-enzyme(发酵菌)和单步色谱纯化蛋白质的媒体。Matrix-assisted激光解吸/电离飞行时间质谱MALDI-TOF女士的分析发酵菌(47.7 kDa)处理peptide-N-glycosidase F (PNGase F)确定4糖基化网站,和乳沟的发酵菌α-酸beta-subunits(14.6和33.3 kDa)激活酶。尺寸排阻色谱法估计的质量活跃的酶如45 + / - 3 kDa,暗示一个α/β异质二聚体的形成。MALDI-TOF MS指纹覆盖超过80%的氨基酸序列,包括氨基肽和证据的缺乏亚基之间的二硫键。半胱氨酸残基的意义建立了他们的选择性烷基化导致几乎完全丧失的活动。纯化酶的活动特征与豌豆和小说fluorogenic衬底,N - (4-methyl香豆素)palmitamide (PAMCA)。NAAA生产足够数量和高通量分析可能是有用的在发现小说抑制剂和确定这种酶的结构和功能。