功能分析的纯化anandamide-generating磷脂酶D作为金属-β-内酰胺酶家族的一员。
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王J, Okamoto Y, Morishita J, Tsuboi K, Miyatake,建筑师N
功能分析的纯化anandamide-generating磷脂酶D作为金属-β-内酰胺酶家族的一员。
生物化学杂志。2006年5月5日,281 (18):12325 - 35。doi: 10.1074 / jbc.M512359200。Epub 2006年3月9日。
- PubMed ID
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16527816 (在PubMed]
- 文摘
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在动物组织中,生物活性N-acylethanolamines包括神经叫花生四烯酸乙醇胺形成从相应N-acylphosphatidylethanolamines(午睡)特定的催化磷脂酶D (NAPE-PLD),属于金属-β-内酰胺酶家族。尽管其潜在的生理重要性,NAPE-PLD尚未与纯化酶制剂的特点。在目前的研究中我们表达了重组NAPE-PLD在大肠杆菌和高纯度。纯化酶在剂量依赖性的方式显著激活毫克分子浓度Mg2 + Ca2 +和,因此,似乎持续活跃。午睡的酶表现出极高的特异性不同glycerophospholipids但没有显示明显的选择性不同的长链或中等链n -种午睡。这些结果暗示的能力NAPE-PLD降解不同的小睡在不损害其他膜磷脂。金属分析显示在NAPE-PLD催化地重要的锌的存在。此外,定点诱变研究写给几个组氨酸和天冬氨酸残基的NAPE-PLD在金属-β-内酰胺酶高度保守的家庭。单突变asp - 147, - 185, - 187, asp - 189, - 190, - 253, asp - 284, - 321催化活性的废止或显著减少造成的。此外,当六个半胱氨酸残基分别突变丝氨酸,只有C224S显示大大减少活动。 The activities of L207F and H380R found as single nucleotide polymorphisms were also low. Thus, NAPE-PLD appeared to function through a mechanism similar to those of the well characterized members of this family but play a unique role in the lipid metabolism of animal tissues.