替换硒代半胱氨酸的半胱氨酸的催化中心类型III iodothyronine deiodinase降低催化效率和改变衬底偏好。
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柯伊伯GG, Klootwijk W,维瑟TJ
替换硒代半胱氨酸的半胱氨酸的催化中心类型III iodothyronine deiodinase降低催化效率和改变衬底偏好。
内分泌学。2003年6月,144(6):2505 - 13所示。doi: 10.1210 / en.2003 - 0084。
- PubMed ID
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12746313 (在PubMed]
- 文摘
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人类类型III iodothyronine deiodinase (D3)催化转化T rT(3)(4)和T (3), 3 ' -diiodothyronine (T2)内环deiodination。像第一种和第二种iodothyronine deiodinases, D3蛋白质含有硒代半胱氨酸(SeC)的高度保守的氨基酸催化中心核心位置144。评估的贡献SeC144 D3酶的催化特性,我们生成的突变体中半胱氨酸(D3Cys)或丙氨酸(D3Ala)取代SeC144 (D3wt)。因为细胞转染和表达向量编码D3wt D3Cys或D3Ala蛋白质。动力学分析与二硫苏糖醇减少代数余子式匀浆。T的米氏常数(3)高出5倍D3Cys比D3wt蛋白质。相比之下,米氏常数T(4)增加了100倍。D3Ala蛋白是惰性酶。半定量的匀浆免疫印迹,D3抗血清透露,高出50倍数量的D3Cys D3Ala蛋白质表达相对于D3wt蛋白质。beplayapp的相对底物转化率D3Cys患病率减少T(3)和T (4) deiodination 3年来减少了,而D3wt酶。 Studies in intact COS cells expressing D3wt or D3Cys showed that the D3Cys enzyme is also active under in situ conditions. In conclusion, the SeC residue in the catalytic center of D3 is essential for efficient inner-ring deiodination of T(3) and in particular T(4) at physiological substrate concentrations.