功能钙结合网站ADAMTS13 metalloprotease域的。
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加德纳博士Chion CK, de Groot R,沙,Crawley JT,莱茵达
功能钙结合网站ADAMTS13 metalloprotease域的。
血。2009年1月29日,113 (5):1149 - 57。doi: 10.1182 / - 2008 - 03 - 144683血。Epub 2008 12月1。
- PubMed ID
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19047683 (在PubMed]
- 文摘
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ADAMTS13调节的multimeric大小血管性血友病因子(VWF)。它的功能是高度依赖于Ca(2 +)离子。使用的初始利率衬底(VWF115 VWF残留1554 - 1668)蛋白水解作用由ADAMTS13 preincubated不同Ca(2 +)的浓度,高亲和性功能ADAMTS13 Ca(2 +)绑定网站建议80 K (D (app))的妈妈(+ / - 15妈妈)确凿之前报道的一项研究。当Glu83或Asp173(残留参与预测Ca(2 +)绑定网站ADAMTS13 metalloprotease域)突变为丙氨酸,Ca(2 +)依赖的蛋白水解作用底物是不受影响。因此,我们寻求并确定候选人Ca(2 +)绑定网站接近ADAMTS13活跃的网站,可能包括Glu184、Asp187, Glu212。诱变的残留在这个网站丙氨酸显著减K (D (app)) ADAMTS13 Ca(2 +),和D187A E212A也减少了V (max)大约25%的正常。动力学分析Asp187突变的存在过剩的Ca(2 +)透露了一个大约13倍降低特异性常数,k(猫)/ k (m),由两个k的变化(m)和k(猫)。这些结果证实使用plasma-purified VWF作为衬底。在一起,我们的研究结果表明,Ca(2 +)的一个主要影响在ADAMTS13通过绑定功能是介导的高亲和性站点附近其活性部位间隙。