毕赤酵母表达重组人蛋白酶抑制剂6的制备及特性研究。

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孙杰，考夫林P，塞勒姆HH，伯德P

毕赤酵母表达重组人蛋白酶抑制剂6的制备及特性研究。

生物化学学报，1995 9月27日;1252(1):28-34。0167 - 4838 . doi: 10.1016 /(95) 00108 - 7。

PubMed ID

7548163 (PubMed视图

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摘要

人细胞内丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂6 (PI-6)在嗜甲基酵母毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达。将PI-6 cDNA进行修饰，在起始密码子后立即编码6个组氨酸残基，并将其置于酵母酒精氧化酶启动子pHIL-D2的控制下。在甲醇诱导下，酵母细胞内产生了活性重组PI-6，细胞裂解后，用硝酸镍-三乙酸(NTA)树脂亲和层析法从酵母蛋白中分离出PI-6。研究了重组PI-6与一系列丝氨酸蛋白酶的相互作用。二级关联速率常数(ka)用于胰蛋白酶(1.8 x 10(6) M-1 s-1)、凝血酶(1.2 x 10(5) M-1 s-1)、尿激酶纤溶酶原激活剂(4.0 x 10(4) M-1 s-1)、纤溶酶(1.3 x 10(6) M-1 s-1)和活化蛋白C (7.5 x 10(3) M-1 s-1)的相互作用。通过监测复合物的形成，重组PI-6也显示出与Xa因子相互作用。虽然PI-6显然是糜胰蛋白酶、白细胞弹性蛋白酶和组织蛋白酶G的底物，但未观察到与糜胰蛋白酶、人白细胞弹性蛋白酶、组织蛋白酶G和组织纤溶酶原激活物形成复合物。

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药物靶点

药物	目标	种类	生物	药理作用	行动
Drotrecogin阿尔法	Serpin B6	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节