Raf-1激酶主要磷酸化位点的鉴定。
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Morrison DK, Heidecker G, Rapp UR, Copeland TD
Raf-1激酶主要磷酸化位点的鉴定。
中华生物化学杂志，1993年8月15日;268(23):17309-16。
- PubMed ID
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8349614 (PubMed视图］
- 摘要
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用各种生长因子和有丝分裂原处理细胞会导致Raf-1激酶的快速过度磷酸化和激活。为了确定磷酸化事件是否影响Raf-1活性，我们已经启动了实验来确定Raf-1的磷酸化位点。在这篇报道中，我们发现在被编码人Raf-1的重组杆状病毒感染的哺乳动物细胞和Sf9昆虫细胞中，Raf-1的主要磷酸化位点为Ser43, Ser259和Ser621。缺乏激酶活性的突变Raf-1蛋白在体内也会在这些位点磷酸化，这表明这些磷酸化事件不是自磷酸化的结果。此外，我们发现Thr268是体外自激酶实验中Raf-1磷酸化的主要残基。此外，我们还检测了杆状病毒表达的含有这些磷酸化位点突变的Raf-1蛋白的生化活性。在体外蛋白激酶实验中，Ser259突变蛋白比野生型Raf-1的活性高2倍，Ser621突变蛋白作为激酶不活跃。对Ser259和Ser621周围残基的分析表明，RSXSXP可能是在这些位点磷酸化Raf-1的激酶的一致序列。有趣的是，这些RSXSXP序列在所有Raf家族成员的进化过程中是完全保守的。