人尿糖蛋白组学;通过CID和ECD对N-和o -链糖基化的附着位点特异性分析。

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李建军，李建军，李建军，李建军

人尿糖蛋白组学;通过CID和ECD对N-和o -链糖基化的附着位点特异性分析。

生物信息学学报，2012,30(4):551 - 557。doi: 10.1074 / mcp.M111.013649。Epub 2011年12月14日

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摘要

尿液是蛋白质和废物的复杂混合物，也是生物标志物发现的一种具有挑战性的生物液体。先前的蛋白质组学研究已经鉴定了2800多种尿蛋白，但缺乏旨在揭示尿糖蛋白的聚糖结构和糖基化位点的分析。糖蛋白组学表征仍然很困难，因为主要在天冬酰胺(n -连接)或丝氨酸/苏氨酸(o -连接)残基上发现的聚糖结构很复杂。我们开发了一种糖蛋白组学方法，结合了尿糖蛋白/糖肽的高效纯化和糖肽分析的互补质谱片段技术。我们从临床样本量开始，通过透析去除干扰性尿化合物，并通过冻干浓缩纯化的尿蛋白。唾液化的尿糖蛋白通过肼化学和胰蛋白酶消化结合成固体载体。利用碰撞诱导解离(CID)和电子捕获解离碎片技术，采用串联质谱(MS)对通过温和酸水解释放的解离糖肽进行了表征。在CID-MS(2)中，典型地观察到Hex(5)HexNAc(4)-N-Asn和HexHexNAc-O-Ser/Thr，分别与已知的n -链双天线络合物型和o -链核心1-样结构一致。特定的N-和o -连接的糖肽的其他糖形式也被确定，例如四天线N-聚糖和集中的核心2-样o -聚糖。随后的CID-MS(3)，从CID-MS(2)分析中选择片段离子，产生肽特异性的b-和y-离子，用于肽鉴定。 In total, 58 N- and 63 O-linked glycopeptides from 53 glycoproteins were characterized with respect to glycan- and peptide sequences. The combination of CID and electron capture dissociation techniques allowed for the exact identification of Ser/Thr attachment site(s) for 40 of 57 putative O-glycosylation sites. We defined 29 O-glycosylation sites which have, to our knowledge, not been previously reported. This is the first study of human urinary glycoproteins where "intact" glycopeptides were studied, i.e. the presence of glycans and their attachment sites were proven without doubt.

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多肽

名字	UniProt ID
凝血酶原	P00734	细节
凝血因子X	P00742	细节
维生素k依赖蛋白C	P04070	细节
-1-酸性糖蛋白	P02763	细节
蛋白质们	P02760	细节
Alpha-1-antitrypsin	P01009	细节
前表皮生长因子	P01133	细节
基膜特异性硫酸肝素蛋白多糖核心蛋白	P98160	细节
CD44抗原	P16070	细节
血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂	P05154	细节
Syndecan-2	P34741	细节
血浆蛋白酶C1抑制剂	P05155	细节
Zinc-alpha-2-glycoprotein	P25311	细节
羧肽酶B2	Q96IY4	细节
-1-酸性糖蛋白	P19652	细节
脊髓灰质炎病毒受体	P15151	细节
载脂蛋白D	P05090	细节
α -1链C区	P01876	细节
Alpha-2-HS-glycoprotein	P02765	细节
胰蛋白酶间抑制剂重链H2	P19823	细节
胰蛋白酶间抑制剂重链H4	Q14624	细节
Prostaglandin-H2 D-isomerase	P41222	细节
CD27抗原	P26842	细节