解决一个错义突变在人类基因组DNA通过变性梯度凝胶电泳和使用体外扩增DNA直接测序:产生HPRT慕尼黑。
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Cariello NF,斯科特•JK Kat AG) Thilly WG, Keohavong P
解决一个错义突变在人类基因组DNA通过变性梯度凝胶电泳和使用体外扩增DNA直接测序:产生HPRT慕尼黑。
J哼麝猫。1988年5月,42 (5):726 - 34。
- PubMed ID
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3358423 (在PubMed]
- 文摘
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的结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)和体外DNA扩增允许我们(1)本地化100 - bp DNA突变给定地区的人类基因组和(2)迅速没有克隆的DNA序列。DGGE表明,突变发生,但是技术显示对突变的性质或位置。beplayapp包含突变的区域的基因组是由聚合酶连锁反应放大技术,提供足够数量和质量的DNA直接测序。放大了32 p end-labeled底漆,允许直接Maxam-Gilbert放大产品没有克隆测序。HPRTMunich被发现含有单个碱基对替换,C-to-A颠换397碱基对的位置。我们报告的一代169 - bp,野生型DNA探针,包括大多数人类外显子3的次黄嘌呤鸟嘌呤phosphoribosyltransferase产生HPRT基因和包含一个低温融化域约100个基点。HPRTMunich,产生HPRT基因突变与痛风患者,一个氨基酸替换;相应的DNA序列改变必须位于外显子3的低温融化域。我们报告的分离HPRTMunich使用DGGE从野生型序列。除了碱基对替换,DGGE也是敏感分子的甲基化状态。 The cDNA for HPRT was cloned into a vector and propagated in Escherichia coli dam+ and dam- strains; thus, methylated and unmethylated HPRT cDNA was obtained.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)