筛查基因突变在人类身体里的非放射性单链构象多态性。
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Jorge某人梅洛MB,科斯塔FF, Sonati MF
筛查基因突变在人类身体里的非放射性单链构象多态性。
布拉兹J地中海生物研究2003年11月,36 (11):1471 - 4。Epub 2003年10月22日。
- PubMed ID
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14576901 (在PubMed]
- 文摘
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点突变和小插入或删除在人类身体里的基因可能产生alpha-chain结构变异和alpha-thalassemia。突变可以通过直接检测DNA测序或筛选方法,选择突变的外显子测序。虽然小(约1 kb, 2 3外显beplayapp子和内含子),身体里的基因复制(alpha2和α1)和高g c丰富,这使得他们很难变性,降低测序效率,导致频繁的工件。我们修改了一些条件PCR和电泳检测这些基因突变采用非放射性单链构象多态性(SSCP)。底漆之前被其他作者对放射性SSCP和phast-SSCP +变性梯度凝胶电泳结合起来,产生的碎片(每alpha-gene原来6新除了6)提交SSCP银染色。九个结构和一个thalassemic突变进行了测试,在不同条件下包括两个电泳装置(PhastSystem和GenePhor Amersham生物科学)、聚丙烯酰胺凝胶浓度不同,运行温度和变性剂,整个和限制性内切酶切片段。百分之一百的敏感性是实现四个新的碎片形成,使用PhastSystem和凝胶20% 15度,没有限制性内切酶的需要。这个非放射性PCR-SSCP方法显示很简单,快速和敏感,减少频繁的重复序列和所涉及的成本增加结果的可靠性。它可以是特别有用的实验室没有一个自动测序仪。