重组肌管合成人因子IX的翻译后修饰。
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Arruda VR, Hagstrom JN, Deitch J, hemanan - patterson T, Camire RM, Chu K, Fields PA, Herzog RW, Couto LB, Larson PJ, High KA
重组肌管合成人因子IX的翻译后修饰。
《血》2001年1月1日;97(1):130-8。
- PubMed ID
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11133752 (PubMed视图］
- 摘要
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最近的数据表明，将表达凝血因子IX (F.IX)的腺相关病毒(adeno-associated viral, AAV)载体引入骨骼肌，可使该转基因产物长期表达，改善b型血友病动物的出血素质。这些数据表明，骨骼肌可合成具有生物活性的F.IX。IX因子在肝脏中进行广泛的翻译后修饰，肝脏是合成的正常部位。除了影响特异性活性外，这些翻译后修饰还可以影响恢复、循环中的半衰期和蛋白质的免疫原性。在开始aav介导的肌肉导向方法治疗血友病B的人体试验之前，对骨骼肌中合成的F.IX进行了详细的生化分析。以表达F.IX的AAV载体转导的人肌管为模型系统。使用一种新的策略从条件介质中纯化F.IX，该策略旨在纯化所有rF物种的代表材料。IX在介质中。纯化后的F.IX经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、n端序列分析、γ -羧谷氨酰化学分析、碳水化合物分析、酪氨酸硫酸化和丝氨酸磷酸化测定以及比活性测定。结果表明，肌管合成的F.IX具有与肝脏合成的F.IX相似的特异活性。对特异性活性至关重要的翻译后修饰，包括信号序列和前肽的去除，以及n端谷氨酸残基的γ -羧化，也相似，但碳水化合物分析和酪氨酸硫酸盐化和丝氨酸磷酸化的评估揭示了差异。小鼠体内实验表明，这些差异影响肌肉合成的F.IX的恢复，但不影响半衰期。