抑制性甘氨酸受体氨基端胞外域内二硫键的映射。
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沃格尔N, Kluck CJ, Melzer N, Schwarzinger S, Breitinger U, Seeber S, Becker CM
抑制性甘氨酸受体氨基端胞外域内二硫键的映射。
中国生物化学杂志，2009年12月25日;284(52):36128-36。doi: 10.1074 / jbc.M109.043448。Epub 2009 10月27日。
- PubMed ID
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19861413 (PubMed视图］
- 摘要
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马钱子碱敏感的甘氨酸受体(GlyR)是配体门控氯通道和半胱氨酸环(Cys-loop)神经递质受体超家族的成员，它还包括烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)。在细胞外结构域(ECD)中，同名的Cys-loop含有两个保守的半胱氨酸，被认为是由超家族特异性的二硫键连接的。GlyR ECD携带三个额外的半胱氨酸残基，其中两个预计会形成第二个GlyR特异性键。然而，尚未直接确定GlyR的半胱氨酸的构型。基于nAChRalpha1 ECD的晶体结构，我们生成了人类GlyRalpha1的模型，其中各自半胱氨酸的接近与Cys-loop和glyr特异性二硫键的形成一致。为了识别天然的二硫键，GlyRalpha1的ECD在氧化条件下异质表达和重折叠。通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，我们检测到ECD的胰蛋白酶片段，表明两对半胱氨酸的二硫键形成，正如建模所提出的那样。通过对半胱氨酸和赖氨酸残基进行化学修饰，确认了胰蛋白酶片段的身份。从圆二色光谱中可以明显看出，在体外，单个半胱氨酸的突变不会损害ECD的再折叠，但它会导致部分或完全的细胞内保留，从而导致人胚胎肾293细胞中全长GlyR亚基功能的丧失。我们的结果表明，GlyR的ECD形成了一个cys环和一个GlyR特异性的二硫键。 In addition, cysteine residues appear to be important for protein maturation in vivo.