雌激素-糖皮质激素受体嵌合体作为组织选择性雌激素活性药物筛选的潜在用途。
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Maru BS, Tobias JH, Rivers C, Caunt CJ, Norman MR, McArdle CA
雌激素-糖皮质激素受体嵌合体作为组织选择性雌激素活性药物筛选的潜在用途。
骨胳。2009年1月;44(1):102-12。doi: 10.1016 / j.bone.2008.09.016。Epub 2008 10月11日。
- PubMed ID
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18976723 (PubMed视图]
- 摘要
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SERMs在骨中作为ER激动剂，尽管它们在其他组织中具有拮抗特性。根据最近体内研究的证据，这种作用除了抑制骨重塑外，还可能涉及刺激成骨细胞活性。然而，由于缺乏准确的体外模型，探索这一作用的进展受到了阻碍。例如，据报道，ER拮抗剂在成骨细胞中刺激基于雌激素靶基因的报告分析，与它们在体内的抑制作用相反。基于绿色荧光蛋白(GFP)受体嵌合体的形态学和/或转录读出，我们研究了评估ER功能的整体方面是否能更准确地反映成骨细胞中的ER激活。用人ERalpha-GFP融合蛋白转染成骨细胞样(ROS和U2OS)和乳腺癌细胞(MCF7)，并用ER激动剂(17 β -雌二醇和二烯雌醇)、拮抗剂(ICI 182780和ZK 164015)和SERMs(他莫西芬、雷洛昔芬、4-羟他莫西芬(4-HT)和己雌醇)处理。我们通过荧光显微镜研究了这些结构物的细胞区隔化，通过光漂白后的荧光恢复(FRAP)研究了核迁移，并使用ERE-luc报告基因研究了雌激素转录的全局激活。SERMs引起成骨样细胞(但不是乳房细胞)中ERE-luc活性的适度增加，以及乳房(但不是成骨样)细胞中核流动性的降低。然后使用GFP嵌合体重复这些研究，其中人类GR配体结合域(LBD)被人类ERalpha LBD (ERGR-GFP)取代，并结合grer -luc报告。有趣的是，在成骨细胞样(但不包括乳房)细胞中，SERMs增加了ERGR-GFP的细胞质到核转运和grer -luc报告活性。 Indeed, transcriptional responses to SERMs in osteoblast-like cells were considerably greater with the ERGR/GRE-luc than the ERalpha/ERE-luc system, 4-HT inducing 300 and 25% increases in reporter activity respectively. ER antagonists were entirely without effect. We conclude that evaluation of global estrogenic activity, as opposed to activation of a specific target gene, provides a more accurate read-out for osteoblast stimulation. In particular, ERGR-mediated GRE-luc activity provides a high signal response to estrogen agonists and SERMs, in a cell context dependent manner closely resembling that observed in vivo. Further studies utilising this system are justified to explore the mechanistic basis for estrogenic stimulation of osteoblast activity, and to identify newer SERMs capable of targeting this activity.