实验测定的细胞器targeting-peptide乳沟网站使用瞬态转化融合表达绿色荧光蛋白。
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Candat, Poupart P·摩根,Chevrollier, Reynier P, Rogniaux H, Avelange-Macherel MH,鲐鱼D
实验测定的细胞器targeting-peptide乳沟网站使用瞬态转化融合表达绿色荧光蛋白。
学生物化学肛门。2013年3月1日,434 (1):44-51。doi: 10.1016 / j.ab.2012.10.040。Epub 2012年11月9日。
- PubMed ID
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23146587 (在PubMed]
- 文摘
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大多数nuclear-encoded organellar蛋白质包含一个可分裂的presequence,这是必要的蛋白质定位,导入正确的细胞室。知识targetinbeplayappg-peptide乳沟网站是至关重要的结构和功能特性的成熟organellar蛋白质以及导入过程的深入了解。因为低的共识和presequences变异性高,生物信息学的targeting-peptide乳沟未能预测目标肽的长度与高的信心。因此,我们已经开发出一种快速、健壮的实验方法来确定运输肽蛋白的裂解位点导入线粒体和叶绿体。蛋白质前体与绿色荧光蛋白(GFP)表达的融合其糖基瞬变细胞(动物蛋白质)或原生质体(植物蛋白),允许易位进入转运肽的细胞器和删除。溶解后,成熟的蛋白质是immunopurified使用anti-GFP抗体耦合的磁珠。的n端氨基酸序列然后由埃德曼microsequencing或质谱。方法验证使用蛋白质与已知targeting-peptide序列和适用于动植物organelle-targeted蛋白质。