直接检测和动态分析的共价中间形成4-amino-4-deoxychorismate合酶催化反应。
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他Z,托尼
直接检测和动态分析的共价中间形成4-amino-4-deoxychorismate合酶催化反应。
生物化学。2006年4月18日,45 (15):5019 - 28。
- PubMed ID
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16605270 (在PubMed]
- 文摘
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Chorismate-utilizing酶催化多种反应,提供重要生理功能独特的植物,细菌,真菌和某些寄生虫。他们没有在动物身上使他们出色的抗菌素和除草剂的目标。4-Amino-4-deoxychorismate合成酶(adc)催化第一步叶酸biosynthsis和共享一个共同的核心机制isochorismate合成酶(是)和邻氨基苯甲酸盐合成酶(),在C2启动这些反应,亲核试剂添加。之前提供的证据[他,Z。,Stigers一样破旧,k·D。巴特利特,p。托尼,医学博士(2004年)j .。化学。Soc。126年,2378 - 2385],K274 adc的亲核试剂,暗示形成共价中间。在此,我们报告的直接检测共价中间形成ADCS-catalyzed反应谱。不同光谱显示共价中间有一个吸收最大值310海里。这是用于研究pre-steady-state共价中间动力学在不同条件下形成的。 Additionally, E258 in ADCS was shown to be critical to formation of the covalent intermediate by acting as a general acid catalyst for loss of the C4 hydroxyl group. The E258A/D mutants both exhibit very low activity. Acetate is a poor chemical rescue agent for E258D but an excellent one for E258A, with a 20000-fold and 3000-fold rate increase for Gln-dependent and NH(4)(+)-dependent activities, respectively. Lastly, A213 in IS (structurally homologous to K274 in ADCS) was changed to lysine in an attempt to convert IS to an ADCS-like enzyme. HPLC studies support the formation of a covalent intermediate with this mutant.