人类的肝脏烟酰胺N-methyltransferase。cDNA克隆,表达,和生化特征。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
Aksoy年代,Szumlanski CL,温什波姆RM
人类的肝脏烟酰胺N-methyltransferase。cDNA克隆,表达,和生化特征。
生物化学杂志。1994年5月20日;269 (20):14835 - 40。
- PubMed ID
-
8182091 (在PubMed]
- 文摘
-
烟酰胺N-methyltransferase (NNMT)催化的N-methylation烟酰胺和其他吡啶。人工肝NNMT活动有双峰频率分布,这就带来了一种可能的观察意见,这使得这种酶活性可能是由遗传多态性,多态性可能功能对药物的个体差异和异型生物质毒性的影响。第一步测试假说,我们着手克隆和表达对人类肝cDNA NNMT。人类肝脏NNMT部分纯化、photoaffinity-labeled受到有限的蛋白水解作用,和部分氨基酸序列信息。聚合酶链反应被用来放大550核苷酸序列与人类肝cDNA模板和引物设计的基础上NNMT氨基酸序列。5 ' - 3 '末端的人类肝脏NNMT cDNA得到利用的迅速放大cDNA结束。结合使用这些方法导致的人类肝脏NNMT cDNA隔离969个核苷酸长度,以792 -核苷酸开放阅读框编码264个氨基酸的蛋白质分子质量计算的29.6 kDa。人类肝脏NNMT cDNA体外转录和翻译网织红细胞溶解产物系统产生蛋白质的分子量大约29 kDa期间comigrated SDS-polyacrylamide与人类肝NNMT photoaffinity-labeled凝胶电泳。NNMT cDNA也是subcloned到真核表达载体p91023 (B)。COS-1细胞转染与构建表达高水平的NNMT酶活性,和这个活动的生化性质类似于人类的肝脏NNMT。 Human liver NNMT and transfected COS-1 cell NNMT had apparent Km values for the two cosubstrates for the reaction, nicotinamide and S-adenosyl-L-methionine, of 0.43 and 0.38 mM and of 1.8 and 2.2 microM, respectively. IC50 values for the inhibition of NNMT by N1-methylnicotinamide were 60 and 30 microns for human liver and COS-1 cell-expressed NNMT, respectively. Cloning of a cDNA for human liver NNMT will help make it possible to test the hypothesis that inheritance may play a role in the regulation of individual differences in human liver NNMT activity.