人溶酶体-葡萄糖苷酶。催化位点的表征。
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刘建军，刘建军，张建军，张建军
人溶酶体-葡萄糖苷酶。催化位点的表征。
生物化学学报，1997,25(2):357 - 357。
- PubMed ID
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1856189 (PubMed视图］
- 摘要
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底物类似物conduritol B环氧化物(CBE)被证明是人类溶酶体α -葡萄糖苷酶的活性位点定向抑制剂。以天然糖原和人工底物4-甲基伞形菊- α - d -葡萄糖吡喃苷为竞争抑制模式。酶的失活是时间和浓度依赖的，并导致CBE的共价结合。结合的发生需要催化活性。通过微测序和氨基酸分析，分离得到含有溶酶体α -葡萄糖苷酶催化残基的cbe标记肽。这些肽似乎起源于一个在α -淀粉酶、麦芽糖酶、葡萄糖淀粉酶和转葡聚糖酶中高度保守的蛋白质结构域。基于序列相似性和CBE结合机制，预测Asp-518是溶酶体α -葡萄糖苷酶活性位点的必需羧酸盐。通过体外诱变α -葡萄糖苷酶cDNA在瞬时转染的COS细胞中的表达，研究了Asp-518和催化位点周围其他残基的功能重要性。用Glu-513取代Asp-513会干扰α -葡萄糖苷酶前体的翻译后修饰和细胞内转运。残基Trp-516和Asp-518被证明对催化功能至关重要。