鉴定了对糖原(gaa2)亲和力较低的人类酸α -葡萄糖苷酶等位基因的碱基对替换和缺陷细胞中瞬时基因表达。
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马提尼克F，波德金M，李志强S，赫施霍恩R
鉴定了对糖原(gaa2)亲和力较低的人类酸α -葡萄糖苷酶等位基因的碱基对替换和缺陷细胞中瞬时基因表达。
[J] .热学学报，1999,47(3):440-5。
- PubMed ID
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2203258 (PubMed视图］
- 摘要
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被称为酸性葡萄糖苷酶(GAA)或酸性麦芽糖酶的溶酶体酶具有遗传多态性，在正常人群中有三个等位基因分离。罕见的gaa2等位酶对糖原和淀粉有较低的亲和力，但对低分子量底物没有亲和力。在淀粉凝胶中，gaa2等位酶可以通过“亲和”电泳检测到，因为对淀粉基质的亲和力较低，导致gaa2等位酶更快地迁移到阳极。在此之前，我们已经分离并测序了GAA的cDNA，并在缺陷成纤维细胞中短暂表达了该cDNA。为了确定gaa2等位酶的分子基础，我们从gaa2细胞系中构建了cDNA和基因组DNA文库，并确定了编码区的核苷酸序列。在271碱基对上只发现了一个a取代G的碱基对，导致密码子91处天冬氨酸取代天冬氨酸。这种氨基酸取代与gaa2酶更基本的pI一致。碱基对替换也消除了taq - 1位点，预测产生更大的DNA片段。这个较大的taq - 1片段也出现在另外两个表达gaa2同工酶的个体中。将含有碱基对替换的5'片段连接到gaa1等位基因剩余的3' cDNA上，克隆到表达载体中，并在sv40转化的GAA缺陷成纤维细胞中短暂表达。 The enzyme activity exhibited the altered mobility of the GAA 2 allozyme, as demonstrated by electrophoresis in starch gel.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)