定向进化sulfotransferases和paraoxonases祖先库。
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引用
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Alcolombri U,伊莱亚斯M,陶菲克DS
定向进化sulfotransferases和paraoxonases祖先库。
J杂志。2011年8月26日,411(4):837 - 53年。doi: 10.1016 / j.jmb.2011.06.037。Epub 2011年6月24日。
- PubMed ID
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21723874 (在PubMed]
- 文摘
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大型图书馆应用随机突变基因的定向进化实验为了获得足够的可变性。然而,这些库都包含了很多不活跃的变体,和非常低的频率提高变异只能孤立的高通量筛选。小而高效的图书馆组成一个有吸引力的选择。在这里,我们描述的应用祖先libraries-libraries基于突变预测的系统发育分析和祖先的推理。我们设计和建造这样的库使用血清paraoxonases和胞质sulfotransferases酶(结果)模型。这两种酶的家庭表现出一系列的活动在药物代谢和解毒的外源性物质。祖先血清paraoxonase和饥饿库被低吞吐量筛选手段,包括高效液相色谱法,使用基板和/或反应的所有家庭成员表现出较低的活动。库显示一个非常高的频率高度多态和功能多样化的变体。筛选只有300个变异使突变体的隔离高达50倍酶活性高于起点。结构和动力学特征的进化饥饿变体展示一些祖先突变重塑活性部位和调节酶的特异性。 Ancestral libraries therefore comprise a means of focusing diversity to positions and mutations that readily trigger changes in substrate and/or reaction specificity, thereby facilitating the isolation of new enzyme variants for a variety of different substrates and reactions by medium-throughput or even low-throughput screens.