血管紧张素转换酶2外畴脱落裂解位点鉴定:决定因素和限制因素。
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赖振伟，汉查波拉I, Steer DL, Smith AI
血管紧张素转换酶2外畴脱落裂解位点鉴定:决定因素和限制因素。
生物化学。2011 6月14日;50(23):5182-94。doi: 10.1021 / bi200525y。Epub 2011 5月20日。
- PubMed ID
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21563828 (PubMed视图］
- 摘要
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ADAM17，也被称为肿瘤坏死因子α转换酶，参与许多完整膜蛋白的外畴脱落。我们之前报道过ADAM17能够介导人血管紧张素转换酶2 (ACE2)外域的裂解分泌，ACE2是一种严重急性呼吸综合征冠状病毒的功能受体。在这项研究中，我们证明了纯化的重组人ADAM17能够在Arg(708)和Ser(709)之间切割一个20个氨基酸的模拟肽，与人ACE2的细胞外近膜区域相对应。我们还合成了一系列的肽类似物，结果表明，谷氨酸取代Arg(708)和/或Arg(710)位点可以减弱重组ADAM17的裂解过程，而丙氨酸取代Arg(708)和/或Ser(709)位点不能抑制重组ADAM17的裂解过程。CD光谱分析显示，用于ADAM17裂解实验的缓冲系统中肽类似物的二级结构存在微小差异。对表达CHO-K1和CHO-P细胞的ACE2突变体脱落谱的观察表明，Arg(708) -> Glu(708)突变体和Arg(708)Arg(710) -> Glu(708)Glu(710)双突变体在磷酯PMA刺激下产生的ACE2脱落量增加。总之，我们已经证明ADAM17能够切割Arg(708)和Ser(709)之间的ACE2肽序列类似物。这些发现也表明Arg(708)和Arg(710)在ADAM17介导的ACE2外结构域脱落调控中发挥位点识别作用。