Glu-125在人肾二肽酶催化活性中的重要性。
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安达充H片山T中中H辻本M
Glu-125在人肾二肽酶催化活性中的重要性。
生物化学学报，1994,21;1163(1):42-8。
- PubMed ID
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8097406 (PubMed视图］
- 摘要
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羧基试剂n -乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)和丹基乙二胺显示出不可逆的抑制人肾二肽酶(hrDP)的时间依赖方式。西司他汀是酶的竞争性抑制剂，部分地保护了酶的失活。为了鉴定经EEDQ和丹基乙二胺修饰的位点，对修饰酶的胰蛋白酶片段的氨基酸序列进行了广泛分析。将确定的氨基酸序列与预测的hrDP一级结构进行比较，发现Glu115-Arg138片段中的Glu-125被修饰。因此，通过位点定向诱变研究了Glu-125在催化活性中的作用。Glu-125被谷氨酰胺、天冬氨酸或半胱氨酸残基取代。在CHO细胞中表达野生型或突变型酶的cdna，并纯化得到明显同质性的蛋白。突变酶Gln-125-hrDP的特异活性为28.5 U/mg，为野生型的11.4%。相比之下，Asp-125-hrDP和Cys-125hrDP被发现是无活性的(<或= 0.1%的野生型酶)。这些结果表明，Glu-125残基侧链的极性和长度对酶活性有重要影响。